• 首页期刊简介投稿须知编委会订阅指南留言板联系我们ENGLISH
引用本文:鲁军,李刚,赵建宁,杨殿林,修伟明. 5种转基因油菜转化体特异性多重PCR检测方法[J]. 生物安全学报, 2017, 26(3): 244-250.
【打印本页】   【HTML】   【下载PDF全文】   查看/发表评论  【EndNote】   【RefMan】   【BibTex】
←前一篇|后一篇→ 过刊浏览    高级检索
本文已被:浏览 100次   下载 162 本文二维码信息
码上扫一扫!
分享到: 微信 更多
5种转基因油菜转化体特异性多重PCR检测方法
鲁军,李刚,赵建宁,杨殿林,修伟明
作者单位E-mail
鲁军 农业部环境保护科研监测所, 农业部产地环境质量重点实验室/天津市农业环境与农产品安全 重点实验室/天津市农田生态与环境修复技术工程中心, 天津 300191;沈阳农业大学植物保护学院, 辽宁 沈阳 110866  
李刚 农业部环境保护科研监测所, 农业部产地环境质量重点实验室/天津市农业环境与农产品安全 重点实验室/天津市农田生态与环境修复技术工程中心, 天津 300191  
赵建宁 农业部环境保护科研监测所, 农业部产地环境质量重点实验室/天津市农业环境与农产品安全 重点实验室/天津市农田生态与环境修复技术工程中心, 天津 300191  
杨殿林 农业部环境保护科研监测所, 农业部产地环境质量重点实验室/天津市农业环境与农产品安全 重点实验室/天津市农田生态与环境修复技术工程中心, 天津 300191  
修伟明 农业部环境保护科研监测所, 农业部产地环境质量重点实验室/天津市农业环境与农产品安全 重点实验室/天津市农田生态与环境修复技术工程中心, 天津 300191;沈阳农业大学植物保护学院, 辽宁 沈阳 110866 xiuweiming@caas.cn 
摘要:
[目的]全球转基因植物及其产品的数量和种类越来越多,迫切需要可同时精准高效检测多个转化载体的检测方法。[方法]针对RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5个转基因油菜品系的侧翼序列及油菜内源基因cruciferinACruA)序列设计多重聚合酶链式反应特异性引物,通过对转基因油菜、转基因大豆、转基因玉米、转基因水稻、转基因棉花等不同作物进行PCR扩增来测试所选择的引物特异性,优化多重PCR反应引物的浓度,用所建立的检测体系对不同混合比例的转基因油菜进行多重PCR扩增来测试所建立的检测方法的灵敏度。[结果]通过测试,仅在含有目标样品中检测出阳性结果,灵敏度达0.05%,表明所建立的6重PCR检测方法可同时精准检测RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5种转基因油菜转化载体。[结论]所建立的6重转基因油菜转化体特异性PCR检测方法通量高、特异性好、灵敏度高,符合有关转基因产品检测的要求,可作为转基因油菜检测的有效方法。
关键词:  多重PCR  转基因油菜  转化载体特异性
DOI:10.3969/j.issn.2095-1787.2017.03.011
基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(农业部环境保护科研监测所);国家自然科学基金(31200424)
附件
Event-specific multiplex PCR detection method for five genetically modified canola lines
LU Jun,LI Gang,ZHAO Jianning,YANG Dianlin,XIU Weiming
Abstract:
[Aim] With the increased number and variety of genetically modified (GM) plants and their derived products in the world, detection methods that can efficiently detect multiplex transformation vector simultaneously become increasingly important.[Method] Based on flanking sequences of five GM canola line (RF1, MS8, Topas19/2, Oxy235 and RF3) and endogenous reference gene cruciferinA (CruA) for canola, event-specific primers were designed. To analyze specificity and sensitivity of primers, GM canola lines, GM soybean lines, GM maize lines, GM rice lines and GM cotton lines were amplified by single PCR and different DNA concentrations of GM canola were amplified by multiplex PCR.[Result] The developed 6×multiplex PCR assay could specifically detect five canola lines, RF1, MS8, Topas19/2, Oxy235 and RF3. The sensitivity of multiplex PCR detection was 0.05%.[Conclusion] The developed 6×multiplex PCR system has high efficiency, specificity and sensitivity, and could meet the requirements of transgenic component detection. All these results suggested the developed multiplex PCR system could be applied in GM canola detection.
Key words:  multiplex polymerase chain reaction  genetically modified (GM) canola  event-specific